关机:干燥结束后.如需更换干燥物品,则在开箱门更换前先将风机开关关掉,以防干燥物被吹掉;更换完干燥物品后(注意:取出干燥物时,千万注童小心烫伤),关好箱门,再打开风机开关,使实验台再次进入干燥过程;如不立刻取出物品,应先将风门调节旋钮旋转至“Z"处.再把电源开关关掉,以保持箱内干燥;如不再继续干燥物品,则将风门处于“三”处,把电源开关关掉,待箱内冷却至室温后,取出箱内干燥物品.将工作室擦干。定时的设定:若使用定时,则当PV屏显示“5T"时,SV屏显示“0";用加键设定所需别间(分);设置完毕,按一下SET键,使实验台进入工作状态即可。控温检查:第一次开机或使用一段时间或当季节(环境湿度)变化时.必须复核下工作室内测量愠度和实际温度之间的误差,即控温精度。开机:打开电源及风机开关。此时电源指示灯亮,电机运转.控温仪显示经过 "自检” 过程后,PV屏应显示工作室内测量温度.SV屏应显示使用中需干燥的设定温度,此时实验台即进入工作状态。需要带入无菌室使用的仪器,器械,平皿等一切物品,均应包扎严密,并应经过适宜的方法灭菌。无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁,以保证无菌室的洁净度符合要求。无菌室应备有工作浓度的消毒液,如5%的甲酚溶液,70%的酒精,0.1%的新洁尔灭溶液,等等。无菌室一般是在微生物实验室内专辟一个小房间。 可以用板材和玻璃建造。面积不宜过大,约 4 — 5 平方米即可,高 2.5 米左右。
无菌室外要设一个缓冲间,缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向,以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭。室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。无菌室内的地面、墙壁必须平整,不易藏污纳垢,便于清洗。工作台的台面应该处于水平状态。无菌室和缓冲间都装有紫外线灯,无菌室的紫外线灯距离工作台面 1 米。工作人员进入无菌室应穿灭过菌的服装,戴帽子。供试品在检查前,应保持外包装完整,不得开启,以防污染。检查前,用70%的酒精棉球消毒外表面。当前无菌室多存在于微生物工厂,一般实验室则使用超净台。超净台其主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃。通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面,使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下,取内径90mm的无菌培养皿若干,无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml,放至凝固后,倒置于30~35℃培养箱培养48小时,证明无菌后,取平板3~5个,分别放置工作位置的左中右等处,开盖暴露30分钟后,倒置于30~35℃培养箱培养48小时,取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落,10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度,应对无菌室进行彻底消毒,直至重复检查合乎要求为止。在获得了无菌环境和无菌材料后,我们还要保持无菌状态,才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能,否则外界的各种微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的现象,在微生物学中我们叫做污染杂菌。防止污染是微生物学工作中十分关键的技术。一方面是彻底灭菌,另一方面防止污染,是无菌技术的两个方面。另外,我们还要防止所研究的微生物,特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们的实验容器中逃逸到外界环境中去。为了这些目的,在微生物学中,有许多措施。清除排料口时,一定要当主传动完全停止后,方可清除。使用过程中桶盖一定要盖好,否则无法启动。按要求进行设备清洁,填写设备运行记录。设定时间到达时,自动停机,将盛料器准备于出料口下,打开活塞,启动搅拌,把颗粒排出。接通气、水、电源,把气、水转换阀转到通气的位置。气压调至0.5Mpa。搅拌桨与切刀的转动是否为反时针方向。凡带有活菌的物品,必须经消毒后,才能在水龙头下冲洗,严禁污染下水道。而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入。无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上,并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕,应及时清理无菌室,再用紫外灯辐照灭菌20分钟。设定所需温度:按一下SET键.此时Pv屏显示“5P",用↑或↓改变原“SV‘‘屏显示的温度值,直至达到需要值为止。设置完毕后,按一下SET键,PV显示“5T" (进入定时功能)。
若不使用定时功能则再按一下SET键,使PV屏显示测量温度,SV屏显示设定温度即可。风门调节:根据干燥物品的潮湿情况,把风门调节旋钮旋到合适位置,一般旋至“z"处;若比较潮湿.将调节旋钮调节至”三”处(注意:风门的调节范围约60‘角)。样品放置:把需干燥处理的物品放入实验台内,上下四周应留存一定空间,保持工作室内气流畅通,关闭箱门。实验台在工作时,必须将风机开关打开,使其运转,否则箱内温度和测量温度误差很大,还会因此项操作引起电机或传感器烧坏。当实验台工作室温度接近设定温度时,加热指示灯忽亮忽暗,反复多次,属正常现象。一般情况下,在测定温度达到控制温度后30分钟左右,工作室内温度进入恒温状态。实验台内不得放入易腐、易燃、易爆物品干燥。实验台外壳必须良好、有效接地,以保证安全。每次操作过程中,均应做阴性对照,以检查无菌操作的可靠性。在条件较困难的地方,也可以用木制无菌箱代替超净台。无菌箱结构简单,便于移动,箱正面开有两个洞,不操作时用推拉式小门挡住,操作时可以将双臂伸进去。正面上部装有玻璃,便于在内部操作,箱内部装有紫外线灯,从侧面小门可以放进去器具和菌种等。接种针每次使用前后,必须通过火焰灼烧灭菌,待冷却后,方可接种培养物。无菌操作技术当前不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用,而且在许多生物技术中也被广泛应用。例如转基因技术、单克隆抗体技术等。带有菌液的吸管,试管,培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒,24小时后取出冲洗。关闭出料活塞,门信号灯亮,打开物料锅盖,将原辅料倒入锅内,然后关闭物料锅盖。开启切碎、搅拌电机数秒钟,检查各运动转动部件是否正常,然后关闭。按要求调整时间继电器,设置干粉混合时间。按要求设定湿混造粒时间,启动搅拌、切碎开关,进行制粒。待门信号灯亮后,打开物料锅盖,加入粘合剂。设定时间到达时,依次关闭搅拌、切碎电机。 启动搅拌、切碎开关,先用低速开机后,再将速度调至要求,进行干混。如有菌液洒在桌上或地上,应立即用5%石碳酸溶液或3%的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟,再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时,应立即脱去,高压蒸汽灭菌后洗涤。当新设定温度低于100℃以下,用二次升温方式,可杜绝温度“过冲”现象,假设50℃,第一次设40℃,等温度过冲开始回落后再设定至50℃。箱内应经常保持清洁,长期不用应套好塑料防尘罩,放置在干燥的环境室内。操作前的准备1.目的 本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。无菌室应设有无菌操作间和缓冲间,无菌操作间洁净度应达到10000级,室内温度保持在20-24℃,湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。安全注意事项 严格无菌操作,防止微生物污染;操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。无菌室应保持清洁,严禁堆放杂物,以防污染。严防一切灭菌器材和培养基污染,已污染者应停止使用。工作人员进入无菌室前,必须用肥皂或消毒液洗手消毒,然后在缓冲间更换专用工作服,鞋,帽子,口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手),方可进入无菌室进行操作。