布鲁氏菌属可以在常规血液培养基中生长,并且尽管可以在三天内分离到,但是推荐培养21天,且有必要进行末次接种。厌氧菌 从血液中培养出厌氧菌的比率相对比较少,不推荐每个病人常规增加一个厌氧血培养,但如果必要,实验台选用其配套的厌氧培养基来培养厌氧菌。抗凝或进行血栓溶解治疗病人的血标本可能由于部分凝固而存在潜在的纤维蛋白丝,因此可能产生错误的结果。当Fer检测值在>1000 ng/ml以上时,则提示Fer浓度超出了仪器和试剂的检测线性范围,如需要准确报告结果则应稀释重做(分仪器稀释和手工稀释),仪器稀释的结果不需要再乘以稀释倍数,手工稀释则需要乘以稀释倍数。标本的Fer值在6.9-323.0 ng/ml时被认为Fer在正常范围内,但是如果与临床表现或其他影像学不符则应进行动态观察。诊断或鉴别诊断胃肠道等恶性肿瘤必须结合就诊者的自身情况、其他相关影像学检查及临床表现进行综合性判断。对于假阳性结果的原因可能有:血清标本中含有颗粒性物质(红细胞)或纤维蛋白丝、前一份血清标本含有高滴度的Fer使得在加样时存在携带污染、羊水中混有胎儿红细胞、明显的溶血、非特异性反应存在。对Fer轻度增高的标本,实验台应重复检测或进行动态观察。对于其他体液标本和血库库存血的检测结果只能作为参考。对于反复冻融的血标本或含有颗粒性物质的血标本应离心后再进行检测。无菌操作抽取静脉血,成人5~10ml,幼儿1~5ml,(血液与增菌之比1:5~1:10),采血后立即行无菌操作将血液接种于血液培养瓶内,混匀立即送检。ng/ml值表示。AXSYM免疫分析仪采用Master对Fer定标,每个标准浓度(ng/ml)测双份然后取其平均值存贮电脑中,以后在对病人标本检测时,每次将病人标本的测定值通过Fer标准曲线计算得到。失控原因分析:失控信号的出现受多种因素的影响,这些因素包括操作上的失误、试剂、校准物的存贮条件改变、质控品的失效、仪器维护不良以及采用的质控规则、控制范围、一次测定的质控标本数等等。失控信号一旦出现就意味着与测定质控品相关的该批病人标本报告可能作废,此时首先要查明导致失控的原因,是质控品本身的原因还是质控品以外的原因。 如是质控品以外的原因则应判为真失控,与质控品相关的同批次病人标本重新检测;如是质控品本身的原因,则判为假失控,与质控品相关的同批次病人标本不必重测,可以发出报告。
当失控信号出现时,可以采取以下步骤去寻找原因立即重测同一质控品。此法主要用于查明人为误差,每一步都应该认真仔细的操作,以查明失控的原因;另外,这一步还可以查出偶然误差,如是偶然误差,则重测的质控结果应在允许范围(在控),可以认为该批次的病人标本不必重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。对任何一份标本(包括质控品、标准品及检测试剂等)都应视其为具有传染性,操作人员在工作时应戴乳胶手套、穿工作服。一旦发生标本容器划破手或身体、液体溅进眼睛等粘膜处,应立即用大量的水冲洗,同时向上级医师或科领导报告,必要时施以丙种球蛋白预防。心包液、胸腔液、腹腔液、骨髓、脑脊液以及浆膜腔积液均可用血液培养瓶增菌。实验台拒收标本:凡与4.1-4.5所述内容不符的标本,检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因,并提出解决的方案或建议。标本外送:如涉及到需要外送的标本,必须以规定的容器(0.5ml塑料离心管)存放并密封,并根据邮寄规则和要求进行包装,运送时还要放入冰袋(2-8℃)或干冰(-10℃)由专人运送至指定地点指定接收人。标本容器:盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管标本保存:留取的标本最好在3小时内检测,不能立即检测的应放置于2-8℃最长达24小时(可以含有凝块但要密闭以防蒸发),或者-20℃最长达12个月(不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞)。检测血清Fer主要是用于胃肠道癌症的诊断或鉴别诊断(如:胰腺、结直肠、胃等恶性肿瘤),可以动态观察相关疾病的发生发展过程、疗效及预后评估。利用脂肪提取器提取的阿育魏中的脂肪酸,其GC-MS吸收峰见图1,经过中科院新疆理化技术研究所副研究员刘力根据WILLEY库和NkSq98库检索和人工解析确定为棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸,利用归一化法计算出各脂肪酸的含量见表1。实验台不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸之比为6.67:1。以不饱和脂肪酸为主。不饱和脂肪酸具有一定的抗氧化,抗自由基,降血脂的作用[4-5]。但不饱和脂肪酸的含量会随着阿育魏栽培地域的条件不同(气候、土壤)、采收时间的差别及种植种子品质的差异而产生较大的差别。因此,对阿育魏中各种化学成分的测定,有利于制定生药标准、品质等级鉴定老药新用的科学依据。当今世界崇尚绿色健康用药,随着科学的发展,越来越多的传统民族药将被重新认识和挖掘,民族医药将会扮演更加重要的角色,相信在不久的将来它们将焕发出新的生机,为二类新药的开发增添广泛的基础。当Fer检测值在5.9-6.9 ng/ml或323.0-333.0 ng/ml之间一般视为低浓度区或灰区,应当进行重复检测或动态观察。
血液培养瓶根据临床需要可供选择的有:普通培养瓶、中和抗生素瓶、厌氧菌培养瓶及儿童专用培养瓶。 一旦血液注入血培养瓶后,严禁放入冰箱。应在病人发热初期或发热高峰使用抗生素之前抽血,对已经使用过抗生素的患者应在下一次用药前抽取血标本。凡需做血液培养的患者,最好在不同的时间抽血三次。导管头 培养导管头是为了明确细菌来源。最常用的方法是半定量的方法,方法是用5cm长的导管末端部分在血液琼脂平板上滚动4次。培养物出现15个以上的菌落,提示有潜在的导管相关性感染。常规血液培养基不能分离钩端螺旋体。当临床症状提示为弗朗西丝菌(Francisella)感染时,阳性血液培养物需要接种到BCYE琼脂培养基,所有操作应在生物安全三级的层流罩超净台中进行。HACEK群细菌—嗜泡沫嗜血杆菌(Haemphilus aphrophilus)、放线共生放线杆菌(Actinobacillus actinomycemcomitans)、人心杆菌(Cardiobacterium hominis)、侵袭埃肯菌(Eikenellus corrodens)和金氏杆菌(Kingella kingae)与细菌性心内膜炎有关,常规血培养基中可以分离,但培养14天和进行肉汤末次接种会更有效。将革兰染色结果立即向临床电话初级报告。转种羊血平皿及巧克力平皿上,并分别放置普通培养箱及CO2烛缸内350C~37℃孵育培养需氧和兼性厌氧菌;转种布氏血琼脂,厌氧环境培养厌氧菌;转种沙保罗培养基,培养真菌。加样时应避免标本产生气泡,放置试剂时也应避免试剂产生气泡。明显溶血的血清标本或混有胎儿红细胞的羊水标本均会导致错误的结果。血清(浆)中含有颗粒(如红细胞、纤维蛋白丝等)会引起错误的结果,因此离心收集血清(浆)时应不能将这些颗粒的物质加样品杯中。请专家帮助。前6步都未能得到在控结果,如果其他同类型检验项目在控,则需要联系试剂厂家寻求技术帮助;如果其他同类型项目也失控,实验台则需要与仪器厂家工程师取得联系了。更换另一试剂盒,重测失控项目。检查试剂是否过期或贮存环境,更换试剂盒重新检测质控品,如在控则说明试剂存在问题,该批次病人标本应重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。重新校准仪器,重测失控项目。使用新的校准液校准仪器,重新检测质控品,在控则说明是校准问题,该批次病人标本应重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。失控情况处理:操作者在分析质控结果时,如发现质控违背了控制规则,应填写失控报告单,上交专业室主管(组长),由专业室主管(组长)做出是否发出或重测与质控品相关的该批次病人标本检验报告的决定。 开机以后检查库存是否足够(包括纤维杯、bulk soIUtions、标本架的有效性)和垃圾桶是否需要清理。查阅定标结果:从主菜单选择STORED RESULTS/CALIBRATION REVIEW,选择F5(VIEW ALL),选择项目——AFP,查看定标内容,F6——查看详细内容。选择:F4-SCAN用条码阅读器扫描主校正曲线,先上后下移动条码;或者用键盘手工输入条码数据。输入标本架的位置编号,如果系统设定自动标本位置定义,则无须此步骤。如果还有标本需要申请,重复2-7步骤,如无则选择F1——EXIT返回病人项目申请(这时可以查看申请是否正确)。进行仪器维护,重测失控项目。检查仪器状态,检查光源是否更换,对仪器进行清洗维护,然后再测质控品,如在控,则说明是仪器原因,该批次的病人标本应重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。实验台新开另一批质控品,重测失控项目。如果结果在控,则说明前一批血清可能都有问题,检查它们的有效期和贮存环境,以查明问题所在,可以认为该批次病人标本不必重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。新开一瓶质控品,重测失控项目。如果新开的质控血清结果正常,那么原来那瓶质控血清可能过期或在室温放置时间过长而变质,或者被污染,此时可以认为该批次病人标本不必重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。
一旦发现失控,应即时查找和分析原因,并在该结果栏作详细的批注和记录解决的过程;失控情况处理及原因分析详见9“失控处理”。每天将测定的质控结果与质控允许范围进行比较:Fer质控血清一共有三个浓度(20 ng/ml、150 ng/ml、400 ng/ml),质控范围分别为16ng/ml-24ng/ml、120ng/ml-180ng/ml、320ng/ml-480ng/ml。质控试剂:为美国雅培公司提供的配套的质控品,分为高、中、低三个浓度,2-8℃贮存,有效期6个月;每天随常规工作一起检测并保存质控结果,每月一次质控小结,失控要有记录及纠正的结果。分析试剂:为美国雅培公司提供的配套的Fer试剂盒,规格为100test/盒,2-8℃贮存,有效期6个月;在效期内使用试剂。分析仪器:为美国雅培公司提供的AXSYM全自动免疫分析仪,仪器校准请参见仪器操作规程。定标试剂:为美国雅培公司提供的配套的Fer试剂盒中所附带,2-8℃贮存,有效期6个月;每换一次不同批号试剂均应进行重新定标。其他耗材:均为美国雅培公司提供,如MUP、Matrix cell液、4号液、探针清洗液、管道消毒液等,其中MUP为2-8℃贮存,其他均室温存放。标本留取:以空腹为宜,收到标本后最好立即离心留取血清或血浆(凝固血应待其充分凝固后收集血清),不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝,明显溶血的标本不宜采纳,进行抗凝或血栓溶解治疗的病人采血后宜适当延长凝固时间再进行离心分离血清,羊水中如混有胎儿红细胞可能会导致较高的Fer结果,因此抽取羊水应尽量不要混入胎儿红细胞。标本类型:静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本(抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠或EDTA,抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯,使用的比例以厂家推荐为准);其他体液如羊水、胸水、腹水等体液可以作为检测标本,但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。MEIA定量检测Fer不精密度CVs为4.09-6.59%,检出限>1.0ng/ml,灵敏度1.0ng/ml,重复性96-105%,白蛋白、a-1酸性糖蛋白、胆红素等于22种体内相关成份对Fer测定无干扰,携带污染率0.001%。采用了美国雅培公司的专利技术——微粒子酶免疫分析(MEIA),即以anti- Fer包被微粒子(M-Ab)与标本中的Fer形成M-Ab-Ag复合物,当复合物被转移到纤维杯上时,微粒子就不可逆地结合到纤维杯表面的玻璃纤维上,并与加入的碱性磷酸酶标记anti- Fer结合,洗去未结合的游离物质,加入底物——四甲基伞形酮磷酸盐,碱性磷酸酶脱去底物的磷酸基而发出荧光,通过MEIA光路元件检测而得到定量结果。